猪瘟病毒抗体检测试剂盒使用说明书
产品名称
通用名：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)
包装规格
96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
预期用途
猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）引发的一种高度传染性的、出血性和致死性的猪病，其特征为高热以及微血管壁变性导致的广泛出血、坏死和梗塞等。该试剂用于检测猪血清中的猪瘟病毒抗体，并可用于评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果。
原理
本试剂盒包含预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他相关配套试剂，通过酶联免疫法（ELISA）来检测猪血清或血浆中的抗体。在实验过程中，试剂盒会将对照血清和待检样本加入酶标板中。若样品中存在猪瘟病毒抗体，则会与固井上的抗原结合。经过洗涤去除未结合成分后，再加入酶标记物，形成复合物。随后通过TMB底物反应生成蓝色产物，其浓度与样品中特异性抗体的含量成正比。最后，使用酶标仪在450nm波长测定吸光值，以确认样品中是否含有猪瘟病毒抗体。
储存及有效期
试剂需在2～8℃保存，有效期为12个月。开封后的包被板需在2～8℃避光保存，避免潮湿，使用期限为2个月。
适用仪器
适宜使用包含450nm和630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备及可调微量移液器。
样品准备
1. 取动物全血，按照常规方法制备清亮无溶血的血清。样品可在2～8℃保存1周，长期应置于-20℃。
2. 使用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（例如将5μl血清加入195μl稀释液中，充分混匀）。阴性和阳性对照无需稀释。
3. 使用前，将浓缩洗涤液恢复至室温并用蒸馏水或去离子水稀释20倍，成为工作洗涤液（例如19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液）。
检验方法
1. 使用前将试剂盒在室温下放置30分钟，恢复至室温。
2. 取所需的酶标板条，设置阴性和阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封并在2～8℃保存。
3. 在阴性和阳性对照孔中各加入100μl相应的对照液体；在样品孔中每孔加入100μl稀释后的样品。
4. 混匀后盖上盖板膜，放置于37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5. 弃去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次需拍干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，再次覆盖盖板膜，放置于37℃避光反应30分钟。
7. 进行洗涤，重复步骤5。
8. 每孔依次添加底物液A和底物液B各50μl，混匀，第一次盖上盖板膜，放置于37℃避光反应10分钟。
9. 最后在每孔中加入50μl终止液，混匀，并在450nm（630nm可作参比波长）下测定各孔的吸光值。
参考值
在实验正常情况下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≤0.3，阳性对照的平均OD值（ODPC）应≥0.6。
检验结果的判定
1. 样品的OD值为ODS；
2. 计算阈值：SP值 = (ODS - ODNC) / (ODPC - ODNC)；如果SP值≥0.2，则结果判定为阳性；如果SP值＜0.2，则结果判定为阴性。
3. 如果实验结果为阴性，表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
试验方法的局限性
本检测为定性方法，仅能初步评估猪血清或血浆中的猪瘟病毒抗体水平。
注意事项
1. 实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度，并按传染物处理各种实验废弃物。
2. 终止液具有腐蚀性，避免直接接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板从冷藏环境取出时需恢复至室温方可开袋，未用完的板条需置于有干燥剂的密封袋中保存。
4. 在低温下，浓缩洗涤液易结晶，使用前需恢复至室温以保证完全溶解。
5. 洗涤时各孔需加满液体，确保避免孔口有游离酶未被清洗干净。
6. 使用的样品需保持新鲜。
7. 结果判定必须依赖酶标仪的读数。
8. 不同批号的试剂组分不得混用。
津公网安备 12011302120117