一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基+10%FBS+1%P/S

传代方法：建议首次传代比例为1:2

传代情况：每2天更换培养液

备注：请使用无菌离心管收集用于培养基的瓶子，并留作对比培养使用。如对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，建议在细胞状态良好时加入完全培养液并封闭瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。处理步骤如下：

1. 使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，将细胞瓶放置于超净工作台内，务必进行严格无菌操作。

2. 将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时，以使细胞状态稳定后再进行后续处理。

3. 在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片将作为售后服务的重要依据，若未提供照片，则视为细胞状态良好。

4. 传代后，建议保持一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基进行对比培养，操作时请轻松调整瓶盖松紧。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请按以下步骤进行传代：

弃去上清培养液，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，并在显微镜下检查细胞状态。
当细胞大部分变圆并脱落时，轻拍培养瓶并迅速加入至少5ml完全培养基以终止消化。
轻轻吹打使细胞完全脱落并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中并以1000RPM离心5分钟，弃去上清液。
补充1-2ml完全培养基以重悬细胞，并按1:2的比例分瓶传代（分装至两个T25瓶中），再添加5-8ml新完全培养基，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至80%覆盖培养瓶时，按以下步骤进行冻存：

弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
添加1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩后快速加入5ml完全培养液终止消化。
将悬液转移至15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
去除上清，沉淀细胞并加入1ml俄罗斯专享会294无血清冻存液（货号：C7001）混匀，这样可存入冻存管中。
将冻存细胞直接置于-80℃冰箱保存，若后续需转入液氮罐中，请在-80℃冰箱保存至少24小时后再进行转存。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻至无结晶后，用75%酒精擦拭管外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
去除上清，利用5ml完全培养基重悬细胞，然后接种至T25培养瓶中，放置于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。
第二天，更新培养基以维持细胞活力。

四、注意事项

由于某些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。如果明显脱落，请收集所有培养液至离心管中，1000RPM离心5分钟，用于对比培养。沉淀后加入1-2ml胰酶轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，去除上清，重悬后按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基。

五、售后条款

俄罗斯专享会294承诺售后服务包括但不限于以下情况：

若因细胞运输问题（如细胞丢失或瓶身破损）而导致的重发操作。
若细胞受到污染，请在48小时内提供真实实验结果进行核实管理。
针对细胞活性问题，务必在收到产品7天内提供确凿的检测结果进行复发处理。
需提供过去3天内的照片与问题处理步骤，如由技术人员判定责任，适当安排重发。

为了维护客户权益，未满足以上条件的情况将不予重发。