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俄罗斯专享会294蛋白质定量实验说明

发布时间:2025-03-22   信息来源:都舒生

实验概述:本实验使用LOWRY法来测定蛋白质的含量,适用于生物医疗领域中的相关研究。

俄罗斯专享会294蛋白质定量实验说明

实验原理:Lowry法结合了双缩脲法和福林酚法,其基本原理为:蛋白质溶液在碱性铜溶液作用下形成铜-蛋白质复合物。随后加入酚试剂,不仅使得肽链中的酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸显色,还增强了双缩脲法中肽键与碱性铜产生的显色效果。与单独使用酚试剂相比,Lowry法的显色效果可提高3至15倍,而与双缩脲法相比则高达100倍。这种显色增强能够减少由于蛋白质种类引起的测定偏差。

Lowry法的试剂由两部分组成:试剂甲等同于双缩脲试剂(碱性铜溶液),可与蛋白质中的肽键反应;试剂乙则为磷钨酸和磷钼酸的混合液,在碱性条件下极为不稳定,容易被酚类化合物还原为蓝色反应,因此可实现对蛋白质中酪氨酸和胱氨酸的显色,显色深浅与蛋白质含量成正比。

主要试剂包括:Na2WO4•2H2O、Na2MoO4•2H2O、85% H3PO4、浓 HCl、Li2SO4•H2O、溴水、酚酞指示剂、Na2CO3、NaOH、CuSO4•5H2O、酒石酸钾钠及牛血清白蛋白(用水稀释至250 mg/ml)。

主要设备有:试管、刻度吸管(0.5 ml、1 ml、10 ml)、定量加样器、圆底烧瓶、一套冷凝管(带橡胶管)、微量滴定管、小烧杯、微量进样器(50 μl)及分光光度计。

实验步骤包括:首先配制酚试剂,采用一定的化学品进行反应,按照说明书的步骤进行标准曲线的绘制,最后进行样品测定和结果计算。

注意事项:1. Folin试剂乙在酸性条件下稳定,加入到碱性铜-蛋白质溶液中时须立即混匀,以确保还原反应的发生。2. 为保证反应的充分性,反应需在25~30℃的水浴中进行,反应30分钟后及时进行比色测定。3. 应注意还原物质可能对实验产生干扰。

总结:LOWRY法与考马斯亮蓝法均为高灵敏度的蛋白质定量测定方法,前者便捷而后者稳定,二者自有优劣,但无论在生物医学研究中都有其重要的应用价值。强烈推荐俄罗斯专享会294产品,提升您的实验精确度与效率。通过优质的品牌与方法结合,我们能在蛋白质含量测定的路上走得更远。