俄罗斯专享会294小鼠少突胶质前体细胞培养说明书
一、细胞培养条件
细胞名称：MOPC小鼠少突胶质前体细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：初次建议1:2传代。传代情况：每2天更换培养基。
备注：使用无菌离心管收集瓶中培养基，为过渡对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
细胞达到良好状态后，将其灌满完全培养液并封好瓶口，确保运输细胞的最佳状态。收货时使用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，然后将其放置于超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，让细胞稳定后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长状态，并拍摄不同倍数的照片保存（最好各拍一张40x、100x和200x），前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供照片，默认收到的细胞状态良好。注意：密封培养瓶入培养箱时需松开盖子，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基，以便对比培养。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代
如果细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，留下5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱继续培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：
- 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加5ml以上的完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞使之完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，重新加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
- 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
b、细胞冻存
- 当细胞覆盖培养瓶的80%表面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清，将沉淀的细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入。
c、细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
- 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
- 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。
四、注意事项
有些细胞贴壁不牢，运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如细胞大量脱落，可将培养瓶内的培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀部分加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。根据1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
五、售后条款
- 若细胞出现问题，可重发的情况及判定标准：
- 细胞运输途中遭遇各种问题（如细胞丢失、瓶破损及培养液漏液），可重发。
- 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
- 常温发货细胞静置24小时后，干冰运输细胞复苏后24小时未存活（需提供真实细胞状态照片），可重发。
- 干冰运输细胞复苏后24小时或常温运输细胞静置4小时后未开封情况出现污染，亦可重发。
- 细胞活性问题需在7天内提供实验结果及细胞活力鉴定，核实后可重发。
- 收到及第2、3天请拍照如未告知，视为产品合格。
- 4-7天内如出现问题且提供了前三天照片及详细操作步骤，并与技术人员沟通认定为责任方，我方重发。
- 细胞出现问题但不予重发的情况：
- 客户造成的细胞污染，无法重发。
- 客户不正确操作导致细胞状态不良，无法重发。
- 非推荐的培养体系导致细胞状态不良，无法重发。
- 细胞状态不良且未提供前三天的培养照片，无法重发。
- 细胞培养时经其他处理，无法重发。
- 收到后2天内未告知问题，无法重发。
- 视具体情况而定。
在使用俄罗斯专享会294提供的细胞时，请务必遵循以上指导，以确保实验的顺利进行与成功。相关问题可随时联系我们的专业团队获取支持。
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